PBMC细胞电转参数 - 全新高效细胞电转仪

PBMC细胞电转（原代T细胞电转）

在电转条件上，外周血分离的PBMC，纯化的T细胞和纯化的NK细胞都比较类似。这些细胞在未刺激培养时，直径比较小，只有7-8um，电转需要的电压比普通细胞系高很多。

新型号的LE+/EX+仪器有专门的PBMC模式。只需要根据以下推荐的参数调节电压即可。PBMC模式只适用20ul和100ul的电击管，加样后可以室温直接电转。采用高密度细胞电转，100ul可以最多处理1*10E8的PBMC细胞。细胞密度越高，所需要的电压越高

PBMC电转CD19-CAR质粒后用CD3/CD28抗体和IL-2刺激培养6天后用anti-CD19-CAR-PE抗体染色。

细胞量：2-10*10^6细胞

质粒量：2ug（试剂盒纯化）

电转液：Celetrix专用电转液

电转后培养液: 无抗生素培养液+antiCD3/antiCD28/IL2

电转条件：PBMC模式，1200V-1350V

细胞量：1-5*10^7细胞

质粒量：10ug（试剂盒纯化）

电转液：Celetrix专用电转液

电转后培养液: 无抗生素培养液+antiCD3/antiCD28/IL2

电转条件：PBMC模式，1200V-1350V

电转PBMC也可以冰上操作，适合LE/EX仪器型号。该模式下需要提将样品彻底冷却到4℃。电转前的细胞、电转液和电击管都可以置于室温，加样到电击管后，将整个电击管直立完全插入冰中并且在电击管上面也放有冰粒，等待5-6分钟后马上电转。设置脉冲时间为20ms，电压根据电击管型号设定。

20ul： 830-880V 20ms (5-6分钟冷却)
100ul：840-900V 20ms (5-6分钟冷却)
120ul: 1230-1300V 20ms (5-6分钟冷却)
600ul: 1350-1450V 20ms (7-8分钟冷却) （EX/EX+）