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Celetrix Electroporation

全新高效细胞电转仪

有关细胞

什么状态的细胞适合电转

电转需要细胞活性好,一般电转前的细胞培养密度控制在该细胞所能达到的最高密度的50%-70%,选定电转前培养密度后尽量不要再更改

关于贴壁细胞消化的问题

贴壁细胞电转相对于悬浮细胞电转需要先对细胞进行消化,关于细胞消化到什么状态说明消化好了,而不是过度消化了?我们通过利用0.25%胰蛋白酶对常见贴壁细胞Hela,293T等进行消化时发现,当贴壁细胞经过消化后,80%左右细胞边缘开始收缩并变成圆形时说明细胞消化的刚好;而当变圆的贴壁细胞开始要漂浮起来,像悬浮细胞一样漂浮起来时,说明细胞消化过度了,过度消化的细胞由于细胞膜受到损害,电转后更加容易死亡。(详细请见贴壁细胞电转教程)

有关细胞电转参数

是否每一个细胞都有特定的参数?

不是。即使是同一个细胞,电转实际上也没有单一的参数,需要根据实验需要的细胞密度以及温度和DNA情况加以预先测试。

另外,同样的细胞在不同的实验室培养条件下可能需要不同的参数,因此本网站有推荐参数供客户参考。对于没有推荐参数的细胞,可以选择类似直径的细胞参数进行测试。有关问题可以发邮件到 info@celetrix.com,我们会提供技术支持。

为什么每次同样的细胞进行电转,有的时候结果不一样?

很多客户在刚刚接触电转实验的时候都会遇到这个问题,因为影响电转效果的因素有很多,比如:细胞密度、温度、DNA质量等。我们都会建议客户在首次做一个新的细胞电转时可以从推荐的参数出发来做个简单GFP测试找到合适的参数。

初次实验建议按照推荐电压上下隔20V测试,尽量把预先测试的实验条件控制得与正式实验一致,比如测试的时候细胞密度、培养方式、质粒用量等。另外,同样的细胞在不同的实验室培养条件下可能需要不同的参数,因此推荐参数仅供参考。通常GFP荧光在电转1-3个小时后可通过显微镜进行观察,过夜培养后荧光表达更强。

电转实验的主要影响因素

细胞密度对电转的影响

细胞系电转的细胞密度最好在0.5M-2.0M/20ul,或2.5M-10M/100ul. 常用1M/20ul. PBMC直径更小,细胞密度一般为1M-5M/20ul, 或5M-25M/100ul。细胞密度越高可以增加细胞间电流辅助,从而增加细胞的有效电转面积。密度高时电压需要稍微调高一些,所以电转时细胞密度根据实验需要选定后尽量不要变化。

需要特别注意的地方:一个样品加进电击管后,不要等候,马上进行电转,完成后再处理下一个样品,不要把一批样品全部加样完成后再一起电转。等候时间过长,细胞沉降也会导致电击管内上下细胞密度不均匀而降低电转效率。电转完成后细胞可以马上取出培养,也可以等全部样品处理完毕再取出培养。

细胞聚团对电转的影响

当细胞聚团时,其中只有一侧细胞可以被电转,中间和另一侧细胞不能被电转,降低电转效率。所以消化细胞过程中注意细胞不要成团。

温度对电转的影响

温度对电转影响也很大。一般室温(23度)适宜进行电转实验。温度越低,需要电压越高。4度电转比室温23度电转大概需要增加3%到5%的电压。所以为保证电转实验结果可重复性,需要将每次的电转温度保持一致。

DNA质量对电转的影响

DNA越纯净,越有利于电转。DNA中杂质较多时,细胞毒性大,非常不利于电转。市场上在售的大品牌质粒提取试剂盒一般都可以。DNA加得比较多时,电转效率呈线性递增。但是电转时DNA加的过高也会产生细胞毒性,电压需要稍微下调。所以DNA浓度应根据实验需要相应调整,浓度范围一般在10ug/ml-200ug/ml。